论文题目：SMYD5 is a ribosomal methyltransferase that catalyzes RPL40 lysine methylation to enhance translation output and promote hepatocellular carcinoma

期刊名称：Cell Research

成果所有人：蓝斐

论文发表时间：2024年08月05日

致谢平台或仪器：Leica SP8 LSCM共聚焦显微镜； Beckman-Coulter Optima XE-100超速离心机； 基质辅助激光解析电离组织成像仪-rapifleX； 快速超高分辨质谱仪-Fusion-质谱（仪器：蛋白质分析-电喷雾分子量-液质联用-赛默飞 Orbitrap 480）

优秀案例分享：

利用多功能生物医学影像分析平台的Leica SP8 LSCM共聚焦显微镜，拍摄了经过免疫荧光实验处理的高分辨率细胞荧光图像。通过免疫荧光染色过表达SMYD5与细胞内源SMYD5，并通过该仪器的高分辨率图像拍摄，我们成功解析了SMYD5蛋白及其核糖体底物RPL40甲基化在细胞内部的定位。利用分子细胞生物学平台的Beckman-Coulter Optima XE-100超速离心机，通过超速离心精密分离细胞内部的核糖体组分，顺利将不同分子质量大小的核糖体组分分离在不同密度的蔗糖垫体系中，从而完成后续polysome profiling，disome profiling等核糖体相关生物学实验，发现SMYD5丢失的细胞中存在出现halfmer和disome比例升高等现象。使用功能蛋白质组学分析平台的基质辅助激光解析电离组织成像仪-rapifleX仪器，鉴定样品中不同甲基化修饰程度的肽段比例，以此精确测定SMYD5催化核糖体蛋白RPL40甲基化修饰反应进行程度。该仪器也被用于靶向蛋白质谱中标品的质量控制检测中。利用这一仪器我们测定了SMYD5催化RPL40的反应速率和米氏常数，以及人和鼠内源样品甲基化修饰比例的测定。使用快速超高分辨质谱仪-Fusion-质谱（仪器：蛋白质分析-电喷雾分子量-液质联用-赛默飞 Orbitrap 480）用于检测人和鼠样品中的赖氨酸甲基化组，探索未被报道的新型核糖体蛋白赖氨酸甲基化修饰。利用这些数据我们发现了未被报道的SMYD5在RPL40上的赖氨酸甲基化修饰。