论文题目：Enhanced antigen presentation by macrophages promotes human atherosclerosis progression: therapeutic implications

期刊名称：EUROPEAN HEART JOURNAL

成果所有人：魏园园课题组

论文发表时间：2025年11月11日

致谢平台或仪器：Core Facility of Shanghai Medical College, Fudan University,

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本研究旨在阐明人类动脉粥样硬化斑块进展过程中，局部抗原呈递细胞的身份、功能及其调控机制。我们综合利用多重免疫组化/免疫荧光技术，在人体斑块标本及小鼠模型上，实现了对特定细胞亚群的空间定位、表型鉴定和细胞间相互作用的可视化分析，从而证实了斑块内巨噬细胞（而非树突状细胞）是主要的MHCII依赖性抗原呈递细胞，其功能受CIITA转录调控，并直接驱动局部促炎性T细胞反应。在进行免疫组化染色后，我们多次使用数字切片扫描分析系统进行成像分析。首先是对颈动脉斑块连续切片进行Movat染色（形态学）和CD68（巨噬细胞）与αSMA（平滑肌细胞）免疫组化共染。我们成功将斑块分为早期（EFA）、晚期（LFA）和薄帽纤维粥样斑块（TCFA）。TCFA具有最薄的纤维帽和最高的CD68+/αSMA+细胞比值。这建立了清晰的疾病进展模型，并直观显示巨噬细胞积累与斑块不稳定性（TCFA）密切相关，为后续机制研究提供了病理背景。而后对斑块进行MHCII、CD68（巨噬细胞）和ZBTB46（经典树突状细胞特异性标记）的多重免疫荧光染色。在TCFA斑块中，约50%的MHCII+细胞共表达CD68（巨噬细胞源性），而仅有不到10%共表达ZBTB46（树突状细胞源性）。MHCII+巨噬细胞与CD3+ T细胞空间相邻。对TCFA斑块进行CD68和CIITA（MHCII主调控因子）的免疫组化共染色。观察到病变区域的巨噬细胞（CD68+）明确表达CIITA蛋白。在蛋白水平证实了病变巨噬细胞中CIITA-MHCII通路的激活，将转录组学发现（CIITA mRNA上调）落实到功能蛋白层面，为靶向该通路提供了依据。对局部给予Ciita siRNA的Apoe−/−小鼠颈动脉斑块进行MHCII、Mac3（小鼠巨噬细胞标记）和CD3的免疫组化/免疫荧光染色。局部敲低Ciita后，斑块内MHCII+Mac3+巨噬细胞和CD3+ T细胞数量显著减少，两者紧密“并置”的现象也明显减少、表明局部抑制巨噬细胞的CIITA/MHCII通路，可以特异性削弱斑块内的抗原呈递生态位及T细胞聚集，从而缓解动脉粥样硬化，且不影响全身免疫状态。最后对经静脉注射巨噬细胞靶向siCiita纳米颗粒治疗的Apoe−/−小鼠，取其主动脉根部斑块进行MHCII、CD3、CD4与T-bet（Th1细胞关键转录因子）的多重免疫荧光染色，结果显示治疗组斑块内MHCII+巨噬细胞和CD3+ T细胞总量减少。更重要的是，CD4+ T-bet+的促炎性Th1效应T细胞比例大幅下降。