论文题目：A Chemoproteomic Approach for System-Wide and Site-Specific Uncovering of Functional Protein N-Glycosylation

期刊名称：Journal of the American Chemical Society

成果所有人：陆豪杰课题组

论文发表时间：2025年06月26日

致谢平台或仪器：TIMS TOF Pro

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热蛋白质组学（TPP）技术将细胞热位移分析（CETSA）与多重定量质谱分析相结合，允许了蛋白质热稳定性的全局变化解析，并助力了很多内源相互作用的发现。然而，标准的TPP流程依赖于通过多个通道、多个温度点的定量结果拟合求算溶解温度变化（ΔTm），容易因采样不足而遗漏低丰度蛋白或低化学计量的修饰；此外，这种逐个定量也使得整个TPP流程在操作上较为复杂。首先，为了能够对低丰度糖基化修饰影响的蛋白质稳定性进行研究，团队针对传统热蛋白质组学方法（TPP）在灵敏度和通量方面进行了全面提升。该课题组通过理论计算将整个流程精简为两个关键温度区间（37–41°C与47–63°C），提出新的热稳定性参数Rm，仅通过两标定量试剂TMT的标记即可完成。模型数据验证显示，Rm与传统Tm高度相关，并在检测代谢物NADPH和药物panobinostat作用下的蛋白稳定性变化中表现出更高的灵敏度和一致性，且将检测通量提升了5倍。在此基础上，作者进一步将其与N-糖基化蛋白质富集技术相结合开发了GTSP方法，分别计算全蛋白质组与N-糖修饰肽段的Rm值差异，从而判断特定位点的糖基化是否对蛋白质热稳定性产生显著影响。