论文题目：Profiling RNA subcellular localization in situ by TATA-seq.

期刊名称：RNA

成果所有人：胡璐璐

论文发表时间：2025年09月16日

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膜无结构小器官是由RNA及RNA结合蛋白（RBP）通过液-液相分离（LLPS）形成的动态亚细胞结构，在RNA降解（如处理小体P-bodies）、应激颗粒中的翻译抑制以及核斑点中的RNA剪接等生物过程中发挥重要作用。然而，由于缺乏简单、灵敏且特异的研究方法，RNA物种在这些小器官中的研究一直受限。本文介绍了一种新型策略——目标转录本扩增和测序（TATA-seq），用于通过原位靶向转录和线性扩增精确分析膜无小器官中的RNA。TATA-seq利用针对目标小器官标志蛋白的初级抗体，招募与链霉亲和素结合的二级抗体，该二级抗体与含T7启动子的寡核苷酸结合。此过程启动原位RNA逆转录，随后通过T7 RNA聚合酶扩增，生成足够的材料进行测序，确保重复率不超过25%，比对率约为90%。在数据分析过程中，使用IgG对照去除背景噪音。我们通过对HeLa细胞中由亚砷酸钠诱导的应激颗粒中的RNA进行分析，验证了该方法的有效性，并通过FISH和免疫荧光共定位进行了验证。TATA-seq为研究膜无小器官中的RNA动态提供了一种简单、高灵敏度、准确的工具，推动了RNA研究的能力发展。